提高BAC，Fosmid文库拷贝数，您只差了一支诱导剂
还在纠结“单拷贝克隆产量低，高拷贝克隆稳定性差”这个问题吗？现在只需一支诱导剂就可人为控制质粒的拷贝数啦！
首先安利一下Epicentre的专利技术——CopyControl?克隆系统，能够让您共享单拷贝和高拷贝的优点。CopyControl?克?。菏紫纫缘タ奖葱问缴?，单拷贝可以确保插入稳定及成功克隆编码基因序列；在需要的时候，通过诱导液诱导成高拷贝克隆，以便下游应用所需。这一系统可以用来构建PCR克隆，对于BAC，Fosmid文库等大型质粒格外有用。
CopyControl?克隆系统有两个重要成分，相辅相成，缺一不可：
1．CopyControl? pCC1和pCC2载体
pCC1和pCC2载体含有两个复制起始位点：单拷贝的大肠杆菌F-因子复制子和诱导型的高拷贝oriV。其中OriV的启动，需要trfA基因产物，由CopyControl?的另一个重要成分——TransforMax? EPI300 E.coli菌株提供。
图1 pCC1载体图谱
2．TransforMax? EPI300 E.coli
这是一种工程菌株，含有受诱导启动子控制的trfA基因，在诱导的条件下可以提供启动oriV所需要的trfA基因产物。
图2 TransforMax? EPI300 E.coli菌株基因型
CopyControl?克隆诱导步骤
1、将目标DNA片断连接到已经线性化、去磷酸化的CopyControl? pCC1 Vector上。
2、转化TransforMax? EPI300 E.coli感受态细胞，涂皿，在氯霉素LB培养基上筛选。（在这种条件下，trfA基因的表达被抑制，克隆以单拷贝数量生长。）
3、挑选单克隆，进行培养。
4、加CopyControl? Induction solution到管中，诱导TransforMax? EPI300宿主细胞内trfA基因的表达，从而启动oriV，克隆由单拷贝转化为高拷贝。
5、用常规方法从诱导细胞内分离DNA。
图3 CopyControl?克隆流程
相关产品信息
美国Lucigen公司成立于1998年，提供各类用于分子生物学相关产品，可以使研究者成功克隆较难克隆的基因，其在2016年收购了Illumina旗下Epicentre产品线。目前产品类别主要包括：体外转录、基因克?。˙AC克隆试剂盒）、感受态细胞（TG1噬菌体文库构建感受态）、体外扩增、转座子突变、蛋白表达、文库构建等。
