单细胞水平如何进行基因表达分析？
炎炎夏日，今天给大家介绍一款用于单细胞水平基因表达分析的神器。
基因表达 (gene expression) 是指细胞在生命过程中，把储存在DNA中的遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子（或RNA分子）。很多疾病的发生发展、很多药物的作用机理、很多生物的代谢调控作用等都和基因表达的变化有关，因此对基因表达进行分析十分重要。由于基因表达是在单个细胞水平进行调控，所以需要用多种方法来分析单个细胞如干细胞、神经元、发育组织、激光捕获切片的基因表达方式。
为了便于研究单细胞的基因表达，美国Signosis公司开发出一种基于SYBR Green的单细胞实时荧光定量RT-PCR检测试剂，该试剂可以使用细胞裂解液直接检测基因表达水平，无需RNA制备过程。
* SYBR Green是广泛用于双链DNA的特异性染料，常用作实时荧光定量PCR报告染料。
小编说了半天，下面正式Pick出今日介绍的主角：
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货号 |
产品名称 |
规格 |
目录价 |
品牌 |
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CL-0003 |
单细胞实时荧光定量RT-PCR检测试剂 |
10次 |
￥5,449 |
Signosis |
与其他定量试剂盒相比，Signosis的试剂盒原理是什么？不同之处？优点是？
1）试剂盒包括cDNA合成和PCR扩增的所有试剂：
? 细胞裂解液（1mL）
? Oligo dT
? 随机引物
? 反转录buffer预混液
? 反转录酶
? 对照引物
? SYBR Green PCR预混液
2）您只需要准备：目的基因特异性引物
3）不同之处在于：无需额外制备/提取细胞RNA
4）原理图：
图1 试剂盒原理：细胞裂解液裂解细胞后直接进行反转录及随后的 PCR分析。
5）结果展示：
图2 A: 比较Signosis与其他品牌的细胞裂解液。分别对裂解产物中的β-actin进行30个循环反转录PCR。
B: 基因组DNA污染检测。Lane1：细胞裂解产物不经过反转录直接对β-actin进行36个循环PCR扩增；Lane2：细胞裂解液反转录获得cDNA后对β-actin进行36个循环PCR扩增。
图3 细胞裂解产物中检测靶基因。
随着HeLa细胞数的增加，分别用适量细胞裂解液裂解细胞后进行反转录，而后在7700 PCR仪上进行Actin、GAPDH和B2M基因的3复孔qPCR反应。
6）产品优点：
? 一站式 — 试剂盒包含了从细胞裂解、反转录到PCR的所有试剂
? 无需RNA制备 — 细胞裂解产物可直接用于反转录
? 功能强大 — 该试剂可获得全长的cDNA
? 实时监控 — 整个分析过程可以实时监控
7）FAQs：
a. 细胞裂解液能使用几次？
每个试剂盒里包含1mL的细胞裂解液：
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待裂解细胞数 |
细胞裂解液用量/次 |
使用次数 |
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1000-10000 |
50ul |
20次 |
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50-1000 |
20ul |
50次 |
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1-50 |
5ul |
200次 |
b. 有没有仪器要求？
兼容SYBR Green的PCR仪。
更多信息请点击Signosis官网
www.signosisinc.com
Signosis（美国）：是一家专业的生物试剂产品供应商，致力于基于微孔板分析技术的生命科学研究产品的开发、生产和销售。Signosis成立于2007年，公司专注于细胞因子、转录因子、miRNA及疾病标志物等重要调控因子和标志物的研究，基于自有专利技术，开发完成400多种先进而独特的用于发现、筛选和分析的生命科学研究产品。
